产品货号:
ME0016
中文名称:
miRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称:
DIOG miRNA Stem-loop SYBR qPCR Kit
产品规格:
200T|400T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用化学修饰的热启动聚合酶,使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA的荧光扩增,具有高度的特异性,能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化,PCR扩增效率高,荧光信号强,拥有更高的反应灵敏度。本试剂盒可与miRNA反转录试剂盒(货号:ME0015)。
- 使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,可有效避免非特异扩增;
- 反应缓冲液经充分优化,PCR扩增效率高,反应灵敏度优于多家同类产品。
组分 | 200T | 400T |
2×DIOG miRNA SYBR Mastermix | 1mL×2 | 1mL×4 |
DIOG Tag Primer(10μM) | 80μL | 160μL |
ddH2O | 1mL×2 | 1mL×4 |
保存:-20℃,避光,避免反复冻融,有效期1年。
- 配制反应体系:
取RNase-free离心管,配制如下混合液成分 用量 2×DIOG miRNA SYBR Mastermix 10μL DIOG Tag Primer(10μM) 0.4μL Specific primer(10μM) 0.4μL Temlate DNA/cDNA 2.0μL ddH2O 至20μL - 设置反应程序:
注:仪器类型不同,熔解曲线采集程序不同,使用仪器默认熔解曲线采集程序即可。说明 温度 时间 循环数 激活Taq 95℃ 5min 1 PCR循环 95℃ 10s 40 60℃ 30s 熔解曲线 95℃ 15s 1 60℃ 1min 95℃ 15s
- 一般来说反应体系中引物终浓度为0.2μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在0.1~1.0μM范围内调整引物浓度。
- 未稀释的cDNA模板,加样体积最好不超过2.0μL,对于丰度较高的miRNA,cDNA样本可适当稀释后再进行qPCR,稀释倍数可根据反应CT值而定。
- 如PCR结果不甚理想,可考虑采用3段法温度设置进行扩增,扩增条件为:95℃ 5min;95℃ 10s;60℃ 20s;70℃ 20s(收集荧光信号)。
- 试剂保存与操作过程中避免强光照射。
- 配制反应体系时,避免过于震荡,以防气泡产生。
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